以H129-dTK-T2-pacFlox作为辅助病毒,H129扩增子作为示踪病毒,构建H129Amp示踪系统。示踪病毒H129Amp含多拷贝串联的标记基因,可快速、高效表达标记蛋白,标记下游神经元;传播到下游的H129Amp示踪病毒,不含任何病毒毒性基因,对下游神经元毒性低。将辅助病毒与示踪病毒混合后,单次注射,5天后可高亮标记下游神经元,且对下游神经元毒性低,结合光遗传学工具AAV-DIO-ChR2或H129-dgK-G4顺向跨单级示踪工具,可进行功能研究与顺向跨两级示踪。与传统示踪工具相比,该系统具有标记亮度高、实验周期短、操作简单、毒性低可进行功能与顺向跨两级研究等优点,有望进一步推动神经科学的研究。